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アプリケーション・データ
PicoGreen® を用いた二本鎖DNA定量
特  長
サンプル中に混在するRNA,一本鎖DNA、タンパク質等の影響を受けず高感度に定量が可能です。
用  途
このプロトコルはハイスループット・キャピラリーDNAシーケンサーにおけるシークエンス反応用DNAテンプレート(=鋳型)量の測定やDNA増幅法であるPCRのテンプレート量または増幅DNA量の測定などに広く利用されています。
PicoGreen® を用いたDNA定量法は、dsDNAを特異的に測定できますので、DNAシークエンスやPCRにおけるテンプレート量測定に適しています。
また、ハイスループット処理を実現できます。
検出限界:250pg/ml
直線範囲:0.25〜1,000ng/ml
装置構成MTP-650FA マイクロプレートリーダ
試   薬 :Molecular Probes社製 PicoGreen® dsDNA quantitation reagent *200-2000 assays*
濃度既知のDNA溶液:検量線用
TE buffer:試薬、サンプル希釈用
分析手順
1.試薬、サンプルの調製
(a) PicoGreen®溶液の調製
原液をTEで200倍に希釈し、必要量(100μl/ウェル)を調製する。
※希釈後の溶液は、アルミホイル等で遮光する。
(b)検量線用標準DNAの調製
濃度既知のDNA溶液をTEで希釈し、標準DNAを調製。
(c) サンプルDNAの希釈
必要に応じサンプルDNAをTEで希釈。
2.測定
測定用マイクロプレートにPicoGreen®溶液を 100μlずつ分注
標準DNA、サンプルDNAを 100μlずつ添加し、ピペッティングで混和。
室温で5分間インキュべート
蛍光測定
分析条件
測定方式:エンドポイント測定
フラッシュ回数:20
MODE1:蛍光強度
MODE2:1Ex-1Em
Ex:490nm
Em:530nm
SENS:×1
測定方向:縦
TEMP:OFF
測定モード:END
蛍光焦点:4

データ提供 : (株)日立ハイテクノロジーズ BMC
  ※PicoGreen(R) はMolecular Probes, Inc.の登録商標です。


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