アプリケーションデータ（蛍光測定）

≪ 細胞内Ca²⁺ 応答検出 ≫

特　　長
細胞内におけるCa²⁺ は、細胞外の情報を細胞内に伝えるメッセンジャーの1つです。
例として、興奮時には細胞内のCa²⁺濃度が上昇します。
細胞内Ca²⁺ 測定には顕微鏡や蛍光光度計が用いられており、試薬には蛍光指示薬（Fura 2やFulo 3等）を用います。
マイクロプレートリーダを用いるとハイスループットが可能です。
Fura 2は細胞の外にあるときはアセトキシメチルエステル(-AM)がついています。
細胞のなかにはesteras(エステラーゼ)という酵素があり、Fura 2-AMが細胞内に入るときは、この酵素でアセトキシメチルエステルが外れ、Fura 2-AM→Fura 2になってCa²⁺ と結合し、Ca²⁺ 濃度依存的に蛍光を発するようになります。
MTP-800AFC マイクロプレートリーダは2励起2蛍光測定機能があるため、細胞内Ca²⁺ 応答の多検体測定、短時間測定が可能です。

	細胞へのCa蛍光指示薬負荷 ⇒　 1検体／時
	マイクロプレートリーダでは　　⇒ 10検体以上／時

	Ca 感受性蛍光指示薬、Fura 2-AMを用いた測定例

分析手順

(Fura 2測定法フローチャート)

マイクロプレート上で培養
(HeLa細胞 3～5日)

↓

試薬負荷
(Fura 2-AM 10μM、30min)

↓

2波長(340/380nm) 励起

↓

蛍光(510nm)検出

↓

レシオ計算(EM/EX)

* 蛍光測光開始1分後に薬剤(イオノマイシン)を分注

試　　薬

Ｆura 2-AM special packaging
　　<製造> (株)同仁化学研究所
　　<販売> 和光純薬工業(株)

測定機

蛍光マイクロプレートリーダ MTP-800AFC

	・フィルタ 340nm(EX)
	・フィルタ 380nm(EX)
	・フィルタ 510nm(EM)
	・ DP-50 分注器
	・特注細胞内Caユニット

※マイクロプレートは opticalプレートを用います。

※ 本内容は浜松医科大学光量子医学研究センター櫻井先生のご協力をいただきました。